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Proteintech一級(jí)代理
產(chǎn)品時(shí)間:2020-05-29
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MARCKSL1抗體1出版物

兔多克隆| 貨號(hào):11422-1-AP

物種特異性:人類,老鼠

在以下位置檢測(cè)到正白平衡:人腦組織

在以下方面檢測(cè)到陽(yáng)性IHC:人肺癌組織,人肝癌組織,人胰腺癌組織

 

經(jīng)過(guò)測(cè)試的應(yīng)用

應(yīng)用范圍:WB,IHC,ELISA

應(yīng)用程序未經(jīng)測(cè)試?請(qǐng)參閱我們的保證

注意:建議使用pH 9.0的TE緩沖液進(jìn)行抗原回收;(*)或者,可以用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)

推薦稀釋度:

白平衡:1:500-1:1000

IHC:1:20-1:200

取決于樣品,在“驗(yàn)證”選項(xiàng)卡中檢查數(shù)據(jù)

資源:兔子

純化方法:抗原親和純化

同型:IgG抗體

存儲(chǔ):具有0.1%疊氮化NA和50%甘油pH 7.3的PBS。儲(chǔ)存于-20 Ô C. 等分是不必要的-20 ö下儲(chǔ)存。

免疫原MARCKSL1融合蛋白Ag1967

全名:類馬克1

計(jì)算分子量:195aa,20 kDa

觀察分子量:48 kDa的

GenBank登錄號(hào):BC007904

基因編號(hào)(NCBI):65108

基因符號(hào)MARCKSL1

同義字F52,Mac MARCKS,MACMARCKS,MARCKS like 1,MARCKS like protein 1,MARCKS related protein,MARCKSL1,MLP,MLP1,MRP

 

MARCKS樣蛋白1(MARCKSL1)在神經(jīng)組織中廣泛表達(dá),也被稱為MARCKS樣蛋白(MLP)或MARCKS相關(guān)蛋白(MRP),屬于MARCKS家族,是高度酸性的肉豆蔻酰化家族底物廣泛分布在包括巨噬細(xì)胞在內(nèi)的各種細(xì)胞類型中。由于SDS凝膠上的異常遷移或磷酸化,該蛋白質(zhì)的計(jì)算分子量為20 kDa,表觀分子量為42-48 kDa。MARCKSL1的遺傳破壞導(dǎo)致神經(jīng)管閉合缺陷,取決于肌動(dòng)蛋白功能,細(xì)胞形狀和細(xì)胞遷移的協(xié)調(diào)控制的事件。人們認(rèn)為MARCKSL1調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白的細(xì)胞骨架,從而參與主要的細(xì)胞反應(yīng),如吞噬作用,分泌,運(yùn)動(dòng),有絲分裂和膜運(yùn)輸。

 

免疫印跡和免疫沉淀法: 細(xì)胞裂解物的制備: 將 ripa 緩沖液加入細(xì)胞(35mm 的培養(yǎng)皿中加入100l,60mm 的培養(yǎng)皿中加入200l,100mm 的培養(yǎng)皿中加入500l) ,同時(shí)將培養(yǎng)皿置于冰上。 刮去電池,輕輕地?fù)u動(dòng)懸掛,或者在冰冷的房間里用搖桿或者軌道振動(dòng)器搖動(dòng)15分鐘來(lái)溶解電池。 在冰水中用浴用聲波儀進(jìn)行聲波處理,直到樣品不再粘稠。 將細(xì)胞在12000克的溫度下4 °c 離心5分鐘,取出顆粒。 把上清液移到新鮮的管子里。 細(xì)胞裂解液的終濃度為2-3克 / 升。 對(duì) wb 來(lái)說(shuō),在裂解液中加入4個(gè) sds 停止緩沖液,終濃度為1個(gè) sds。 免疫印跡法: 1。 煮沸10分鐘后,20-50升樣品將載入 sds 頁(yè)面。 對(duì)于大多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō),建議以每道負(fù)荷量30-80克總?cè)芙獾鞍踪|(zhì),因?yàn)榧?xì)胞中80% 的蛋白質(zhì)種類濃度非常低。 圖2。 將凝膠浸泡在免疫印跡轉(zhuǎn)移緩沖液中。 聚偏氟乙烯膜被推薦用于大多數(shù)蛋白質(zhì)。 將薄膜浸入甲醇中1-2分鐘,將薄膜在轉(zhuǎn)移緩沖液中浸泡10分鐘,然后將其放置在一疊厚厚的浸過(guò)緩沖液的濾紙上。 然后用另一堆浸滿緩沖液的過(guò)濾紙蓋上。 把轉(zhuǎn)移裝置蓋上。 凝膠應(yīng)該在膜的負(fù)面。 圖3。 以每平方厘米1毫安的電流跑90分鐘。 圖4。 在室溫下或在4 °c 的溫度下用緩沖液將細(xì)胞膜孵育1小時(shí)。 用清洗緩沖液清洗隔膜35分鐘。 5. 用阻斷緩沖液稀釋一級(jí)抗體。 在室溫下將細(xì)胞膜培養(yǎng)1.5小時(shí)。 用清洗緩沖液清洗隔膜35分鐘。 圖6。 用阻斷緩沖液稀釋二級(jí)抗體。 在室溫下將細(xì)胞膜培養(yǎng)1小時(shí)。 用清洗緩沖液清洗隔膜35分鐘。 圖7。 用清洗緩沖液清洗隔膜310分鐘。 圖8。 用 ecl 顯色。

 

免疫沉淀法: 1。 將200-350升的細(xì)胞裂解液(含有1-3毫克總蛋白質(zhì))轉(zhuǎn)移到微濾管中。 加入150-300升培養(yǎng)液和1-4克一級(jí)抗體到細(xì)胞(或預(yù)先清除的)裂解液中。 JIA抗體濃度應(yīng)通過(guò)滴定法確定,用對(duì)照 igg (對(duì)應(yīng)于一抗源)建立陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)。 在4 °c 的環(huán)境中輕輕搖晃孵化箱2-4小時(shí)或過(guò)夜。3。 加入50升蛋白 a 或克瓊脂糖漿以獲得免疫復(fù)合物。在4 °c 下輕輕搖動(dòng)混合物1-4小時(shí)。 取下端蓋,必要時(shí)將上清液從旋轉(zhuǎn)塔底部釋放出來(lái),再懸浮混合物以提高流速。 用1湯匙含1個(gè)蛋白酶抑制劑的量清洗珠子5次。 后一次清洗后,用500克離心機(jī)將旋轉(zhuǎn)塔在4c 下離心30秒,用收集管收集過(guò)濾液,然后丟棄。 將自旋柱置于新鮮的微濾管中,并將洗脫液集中起來(lái)。 用40l 洗脫緩沖液洗脫,離心8000ー10000g,在4c 條件下洗脫1min,再用新的40l 洗脫緩沖液洗脫一次。 在洗脫液中加入10l 堿中和緩沖液和30l4樣品緩沖液,95-100c 加熱5分鐘。 存儲(chǔ)在零下20攝氏度或加載20-40升在 sds-頁(yè)面,并檢測(cè)它由寬帶。、

 

組織培養(yǎng)細(xì)胞免疫熒光方案: 1。 將細(xì)胞培養(yǎng)在小的圓形蓋玻璃上。 4% pfa 或有機(jī)溶劑固定細(xì)胞20分鐘在4 c (如果你使用有機(jī)溶劑固定,只需跳過(guò)步驟3,直接進(jìn)入步驟4)。 將玻璃倒入0.2% ttiton x-100-pbs 中5分鐘。4。 用 bsa-pbs 在室溫下封閉細(xì)胞1h 或在4 °c 下封閉過(guò)夜。 5. 在蓋玻片上加入50升特異性初級(jí)抗體,在室溫下的潮濕容器中培養(yǎng)1小時(shí)。 在每個(gè)蓋玻片上加入50升熒光標(biāo)記的二級(jí)抗體,室溫下在黑暗中的潮濕容器中孵育1小時(shí)。 用15% 的甘油或者小量的水溶液裝在載玻片上。8。 在邊緣用指甲油封住YIN唇。石蠟包埋組織切片的免疫組織化學(xué):。 二甲苯分別用兩種方法分離載玻片40分鐘和20分鐘。 轉(zhuǎn)移載玻片到100% 酒精,95% 酒精,80% 酒精,60% 酒精和 ddh2o5分鐘。 將載玻片放入裝有抗原恢復(fù)緩沖液的容器中,中間放置微波幾分鐘(700瓦烤箱) ,讓恢復(fù)液在室溫下冷卻。 用 tbs 清洗25分鐘。 在3% h2o2溶液中培養(yǎng)10分鐘,阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性。 用 tbs 清洗25分鐘. 7。 將5-10% 的山羊血清置于 tbs 液中室溫封閉30分鐘。 排水滑梯幾秒鐘(不要沖洗) ,擦拭圓形部分。9。 應(yīng)用 tbs 的一級(jí)抗體。 在室溫下孵化1小時(shí)或在4 °c 下孵化一夜。10。 用湯匙沖洗25分鐘。 在室溫下應(yīng)用預(yù)想的二級(jí)抗體30分鐘。 用 tbs 沖洗25分鐘13。 在室溫下用色原顯影,在顯微鏡下觀察。14。 用流動(dòng)的自來(lái)水沖洗5分鐘。 在市長(zhǎng)的蘇木精浴中反染30-60秒。 在水中洗7-8次,然后自來(lái)水3分鐘。17。 分別用60% 、80% 、95% 和100% 的酒精脫水5分鐘。 轉(zhuǎn)移到二甲苯5分鐘。 空氣30分鐘。19。安裝

 

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